免疫单扩散法测定重组铜绿假单胞菌外毒素A蛋白含量方法的建立及其应用

目的:探索建立免疫单扩散法测定不同料液中重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,rEPA)蛋白含量新方法.方法:对缓冲液系统、最佳抗体浓度和最佳观测时间等关键因素进行摸索,确定方法的最佳条件.在此基础上,对该方法的专属性、精密度、准确性和标准曲线的可靠性进行验证,并将该方法应用于rEPA柱层析纯化中不同样品目标蛋白含量的测定及回收率计算.结果:最佳缓冲系统为0.85％ NaCl溶液,最佳抗体用量为50 μL·mL-1,最佳观测计算时间为4h.方法具有较好的专属性、精密度、准确性和线性.结论:初步建立了免疫单扩散试验测定不同料液中rEPA蛋白含量新方法,为其纯化工艺的优化奠定了基础.