HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄的活力

目的 建立一种HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄活力的方法.方法 酶与其底物7-ADCA及D-对羟基苯甘氨酸甲酯,在20℃的溶液中,搅拌转速为250r/min条件下反应10min,通过测定反应液中头孢羟氨苄的含量,从而换算出合成酶活力的数值.采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:0.02moFL磷酸二氢钾溶液(用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0)-甲醇(98∶2);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长:230nm.结果 头孢羟氨苄在0.24～0.39mg/mL范围内线性关系良好(r=1.0000),回收率均在99％～101％范围内,RSD为0.40％.结论 该测定方法专属性强、准确可靠、重现性好,适用于青霉素酰化酶合成酶活力的检测.