弱化抗性标记筛选高表达 CHO 细胞株的方法建立

为了优化中国仓鼠卵巢细胞（ CHO）表达体系，建立高表达CHO细胞株筛选方法，将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶（ NPT）的261位氨基酸天冬氨酸突变成甘氨酸。经G418筛选，转染含突变型NPT表达载体的细胞存活率显著低于转染含野生型NPT表达载体的细胞存活率。以绿色荧光蛋白-抗体IgG1 Fc结构域融合蛋白为报告基因，验证了突变后新霉素磷酸转移酶对抗生素G418抗性减弱。经G418持续加压培养3周后，转染含突变型NPT表达载体的细胞中EGFP的表达量显著高于转染含野生型NPT表达载体的细胞，表明其具有筛选出高表达单克隆细胞株的潜力。