人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白hBD2-haFGF1的构建、表达及生物信息学分析

目的为开发新型抗痤疮药物,构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白.方法 以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板,分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因.采用SOE-PCR方法构建hBD2-haFGF1融合基因.构建hBD2-haFGF1/pET21b原核表达载体,并转化入E.coli BL(21)进行诱导表达.通过生物信息学方法对融合蛋白的理化性质进行预测和分析.结果 RT-PCR分别获得123 bp的hBD-2基因和420 bp的haFGF-1基因,SOE-PCR获得了588 bp的hBD2-haFGF1融合基因,成功构建原核表达载体hBD2-haFGF1/pET21b,经过IPTG诱导,hBD2-haFGF1融合蛋白可在E.coli BL(21)中有效表达,相对分子量为23 800.生物信息学显示hBD2-haFGF1蛋白适合在大肠杆菌中表达,是一个不稳定的亲水性蛋白,具有较好的热稳定性.hBD2-haFGF1融合蛋白主要由延伸链、β转角和随机卷曲组成,结构中保留了β防御素保守结构域和FGF超家族保守结构域.结论 构建了hBD2-haFGF1融合基因,并在体外诱导表达了hBD2-haFGF1融合蛋白,通过生物信息学分析对融合蛋白的理化性质进行了预测和分析,上述研究为进一步的纯化和活性分析奠定了研究基础.