五味子木脂素对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用及对自噬相关通路的影响

目的 观察五味子木脂素(SCL)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用,并探讨其自噬相关抗炎作用机制.方法 大鼠右后足足跖皮下注射弗氏完全佐剂0.2 mL,足肿胀度≥0.8 mL为造模成功.第1天(D1)开始,大鼠ig给予地塞米松(Dex)0.25 mg·kg-1或SCL 25,50和100 mg·kg-1,持续28 d.测量D0和D28大鼠体质量,观察D1,D21和D28足跖形态.排水法检测足跖肿胀度;检测胸腺和脾指数;HE染色观察大鼠关节组织病理形态并分别半定量检测炎症细胞、滑膜组织增生和OOCHAS评分;RT-PCR法检测足跖滑膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-17、环氧合酶1(COX-1)和COX-2 mRNA表达水平;RT-PCR法和Western印迹法检测足跖滑膜组织中腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Beclin1、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关基因5(ATG5)、ATG7和ATG12基因及蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,模型组体质量明显下降(P<0.01);模型组炎症细胞、滑膜组织增生和OOCHAS评分显著升高(P<0.01);COX-1,COX-2,TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-17 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),AMPK,Beclin1和ATG12 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),mTOR mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),LC3-Ⅱ,ATG5和ATG7 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01).与模型组相比,模型+SCL 50和100 mg·kg-1组体质量显著增加(P<0.01).D1大鼠足跖红肿明显,D21继发性炎症达到高峰.模型+SCL 50和100 mg·kg-1组大鼠滑膜组织炎症细胞明显减少(P<0.05,P<0.01),滑膜组织增生显著减轻(P<0.05,P<0.01),OOCHAS评分显著降低(P<0.01);模型+SCL 25,50和100 mg·kg-1组胸腺指数明显降低(P<0.01);模型+SCL 50和100 mg·kg-1组脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);模型+SCL 50和100 mg·kg-1组关节软骨损伤明显改善(P<0.01);模型+SCL 25,50和100 mg·kg-1组COX-1 mRNA表达无显著差异,模型+SCL 100 mg·kg-1组COX-2,TNF-α和IL-17 mRNA表达明显降低(P<0.05),模型+SCL 50,100 mg·kg-1组IL-1β和IL-6 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01);模型+Dex组COX-1 mRNA表达无显著差异,COX-2,TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-17 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);模型+SCL 50和100 mg·kg-1组AMPK,Beclin1,LC3-Ⅱ,ATG5和ATG7 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),模型+SCL 100 mg·kg-1组mTOR mRNA表达显著降低(P<0.05),ATG12 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);模型+SCL 100 mg·kg-1组AMPK,Beclin1,LC3-Ⅱ,ATG5和ATG7蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),模型+SCL 25,50和100 mg·kg-1组mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),ATG12表达明显升高(P<0.05,P<0.01).结论 SCL对佐剂性关节炎大鼠炎症反应有抑制作用,其机制可能与促进关节滑膜细胞自噬相关.