磷酸肌酸钠通过miR-25-3p/肌浆网Ca2+泵-2a信号通路改善多柔比星诱导大鼠心肌损伤

目的 探讨磷酸肌酸钠(CP)对多柔比星(DOX)所致大鼠心肌损伤的保护机制.方法 ①体内实验:雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、DOX组和CP+DOX联合组,均隔天给药1次,持续26 d.DOX组前3次ip给予生理盐水5 mL·kg-1;之后ip给予DOX 2 mg·kg-1,共7次.CP+DOX组,前3次ip给予CP 200 mg·kg-1;之后隔天ip给予CP 200 mg·kg-1,30 min后再ip给予DOX 2 mg·kg-1,共7次;之后继续隔天ip给予CP 200 mg·kg-1,共3次.停药1周后进行指标检测.②体外实验DOX 1μmol·L-1单独或与N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)0.5 mmol·L-1或与CP 1 mmol·L-1共同处理H9C2心肌细胞24 h.HE染色观察大鼠心肌组织病理变化;Masson染色检测大鼠心肌组织胶原纤维沉积;TUNEL染色检测大鼠心肌组织细胞凋亡;荧光定量PCR分析大鼠心肌组织和心肌细胞H9C2中miR-25-3p mRNA表达;CCK8法检测心肌细胞H9C2存活率;Western印迹法检测大鼠心肌组织和H9C2心肌细胞中超氧化物歧化酶2(SOD2)、肌浆网Ca2+泵-2a(SERCA2a)和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达.结果 ① 体内实验:与正常对照组相比,DOX组心肌组织中肌纤维排列紊乱,胶原纤维累积增加,细胞凋亡增加明显,miR-25-3p mRNA和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平上升(P<0.05),而SOD2和SERCA2a蛋白表达水平下降(P<0.05);与DOX组比较,CP+DOX联合组心肌组织肌纤维排列较为整齐,胶原纤维累积减轻,凋亡细胞明显减少(P<0.05),miR-25-3p mRNA和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平降低,而SOD2和SERCA2a蛋白表达水平明显增加(P<0.05).②体外实验:DOX诱导心肌细胞H9C2内miR-25-3p mRNA和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达呈时间依赖性上调(r=0.9681,r=0.66,P<0.05),而SERCA2a蛋白表达水平在DOX处理3 h后达到峰值,随后逐渐下降至低于细胞对照组.与细胞对照组比较,DOX组存活率显著降低(P<0.05);与DOX组比较,CP+DOX组细胞存活率显著升高(P<0.05);与DOX组相比,CP+DOX组H9C2细胞miR-25-3p mRNA和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平下调(P<0.05),SOD2和SERCA2a蛋白表达明显增强(P<0.05).结论 CP减轻氧化应激,抑制miR-25-3p mRNA表达,促进SERCA2a mRNA和蛋白表达,缓解DOX心肌毒性.