对乙酰氨基酚通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α信号通路影响HepaRG细胞线粒体新生

目的 探讨对乙酰氨基酚(APAP)对HepaRG细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)信号通路介导的线粒体新生的影响.方法 接种HepaRG细胞并给予生长培养基,待细胞长满后,替换为分化培养基进行诱导分化,每天观察细胞形态并拍照.APAP(0.125,0.25,0.5,1,2,4,8和12 mmol·L-1)处理诱导分化后的HepaRG细胞24和48 h,MTT法测定细胞存活率.Western蛋白印迹法检测细胞线粒体新生相关蛋白PGC-1α、核呼吸因子2(NRF-2)和线粒体转录因子A(TFAM),以及线粒体构成蛋白NADH脱氢酶亚基1(ND-1)的表达.结果 诱导分化后显微镜下可见肝细胞样和胆管细胞样2种形态的细胞.与正常对照组相比,APAP作用24和48 h后,随APAP浓度的增加,细胞存活率不断降低,其IC50分别5.64和2.65 mmol·L-1.与正常对照组相比,APAP作用24 h,0.5,1,2和4 mmol·L-1组PGC-1α表达水平显著增加(P<0.01),8 mmol·L-1组显著降低(P<0.01);0.5 mmol·L-1组NRF-2表达水平显著增加(P<0.05),2,4和8 mmol·L-1组显著降低(P<0.01);1 mmol·L-1组TFAM表达水平显著增加(P<0.05),4和8 mmol·L-1组显著降低(P<0.01);0.5,1,2和4 mmol·L-1组ND-1表达水平显著增加(P<0.01),8 mmol·L-1组显著降低(P<0.01).结论 APAP可诱导或抑制HepaRG细胞的线粒体新生,其机制可能与PGC-1α通路蛋白表达有关.