广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响

目的：观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响，并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。方法分别用natrin 5，25和125 mg·L-1预处理原代SD乳大鼠心肌细胞24 h后，再以H2O20.3 mmol·L-1诱导损伤，以Fluo-3为Ca2+荧光探针，应用激光共聚焦显微镜动态检测细胞内游离钙离子浓度变化；另外用natrin 5，25和125 mg·L-1及维拉帕米（Ver）5 nmol·L-1预处理24 h后，再以H2O20.3 mmol·L-1诱导损伤15 min，FQ-PCR法检测心肌细胞钙离子通道Cav1.2，Calm，RyR2和钾离子通道Kir6.2的mRNA表达情况。结果激光共聚焦显微镜检测结果发现，与正常对照组比较，H2O2作用3~15 min心肌细胞内钙荧光平均峰值增强49.37%（P<0.01）；而给予natrin 5，25，125 mg·L-1预处理24 h组该平均峰值分别增强27.52%，12.71%和5.15%，显著低于H2O2组（P<0.01）。PCR结果表明，H2O2损伤组其心肌细胞Cav1.2，Calm，RyR2及Kir6.2的mRNA表达分别为正常对照组的1.78倍，1.26倍，4.34倍和0.79倍（P<0.01）；而给予natrin及维拉帕米干预组，细胞Cav1.2，Calm和RyR2的mRNA表达较H2O2损伤组均显著降低（P<0.01），而Kir6.2的mRNA表达较H2O2损伤组显著升高（P<0.05）。结论广西中华眼镜蛇natrin可明显减轻H2O2所致的心肌细胞钙超载，对心肌细胞过氧化损伤有良好的保护作用，其作用机制可能与降低H2O2损伤的心肌细胞的Cav1.2， Calm和RyR2的mRNA表达及增加Kir6.2的mRNA表达有关。