基于纳升高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱超高分辨质谱技术研究脑心通胶囊中动物药的蛋白质

目的 建立脑心通胶囊中动物药的蛋白质类成分的分析方法.方法 以脑心通胶囊及其投料所用的地龙、水蛭、全蝎动物药材(分别对应通俗环毛蚓Metaphire vulgaris Chen、宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman、东亚钳蝎Mesobuthus martensii Karsch)为研究对象,采用SDS-PAGE电泳技术分离脑心通胶囊及3味动物药材的总蛋白,并进行胶内酶解,同时对脑心通胶囊和全蝎药材的总蛋白进行直接酶解;利用纳升高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱超高分辨质谱技术研究脑心通胶囊中的蛋白质.采用Proteome Discoverer软件,检索环节动物门(Annelida.fasta)和节肢动物门(Arthropoda.fasta)蛋白质数据库以鉴定蛋白质.结果 在9批脑心通胶囊中有5个清晰的蛋白质条带稳定重现,其相对分子质量分别在45、40、30、25、20 kDa左右.在脑心通胶囊总蛋白中共鉴定到28个与动物药相关的蛋白质,这些蛋白质大多与细胞结构、能量代谢、物质运输有关.对胶囊SDS-PAGE中5个条带的蛋白质分别进行分析,各个条带中部分蛋白质可对应归属到3味动物药材;且新鉴定得胍乙基磷酸丝氨酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等蛋白质,前者可能与抗凝血或溶栓活性有关.结论 基于超高分辨质谱技术及蛋白质组学的研究方法用于脑心通胶囊中3种动物药的蛋白质分析,本研究弥补了脑心通胶囊中蛋白类成分研究的空白,为阐明其动物药的物质基础以及进一步研究该胶囊药效与物质基础关联性提供了科学支持.