Her2纳米抗体与改构内皮抑素融合蛋白的克隆、表达和活性研究

开发一种靶向于乳腺癌的双功能蛋白,探索其对乳腺癌细胞的抑制效果和靶向性.通过分子生物学手段构建融合蛋白的原核表达质粒,并对其进行大量表达,包涵体变复性方法获取可溶性目的蛋白.通过CCK8实验检测可溶性目的蛋白对乳腺癌生长的抑制效果,通过细胞免疫荧光实验检测可溶性目的蛋白的靶向特异性和细胞内化作用.使用重叠PCR定点突变技术成功构建出改造型内皮抑素基因endo(m),而后通过限制性酶切法将其连接到原核表达质粒pET28a-Dim上,成功构建出融合表达质粒pET28a-Dim-endo(m).融合蛋白Dim-endo(m)是以包涵体形式被表达,选用包涵体变复性方法获取大量可溶性目的蛋白.细胞免疫荧光检测发现融合蛋白可以结合到乳腺癌Her2表达阳性的SKBR3细胞,同时也能抑制该肿瘤细胞的增殖.pET28a-Dim-endo(m)成功构建并表达,融合蛋白能和乳腺癌细胞Her2受体结合,并在穿膜肽的作用下进入细胞,同时具有一定的抑制肿瘤细胞增殖的作用,可用于后续研究和进一步开发相应的乳腺癌检测试剂.