人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

为获得重组可溶性人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL),该研究首先通过RT-PCR技术扩增人NGAL的基因序列,将目的基因克隆入pET28a表达载体,转化到DH5a感受态细菌中扩增得到原核表达重组质粒pET28a-MBP-NGAL.将质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导,表达MBP-NGAL融合蛋白,同时SDS-PAGE电泳分析验证.后经镍固定金属亲和层析纯化及离子亲和纯化法纯化,并经SDS-PAGE和免疫印迹分析鉴定纯化后重组蛋白的免疫特异性.SDS-PAGE和免疫印迹分析结果表明重组蛋白相对分子质量约为25k.经Ni2+-NTA纯化后,MBP-NGAL重组蛋白在SDS-PAGE下获得单一条带,且MBP-NGAL可与商业化的NGAL单克隆抗体(Clone NL-2)呈特异性反应.制备的NGAL融合蛋白高度可溶,且融合蛋白产物纯度达到90％以上.因此,该研究提供在大肠杆菌中大量生产可溶性重组人NGAL的方法,为进一步研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础.