氯化两面针碱通过甲基化率调控p53和E2F介导肝癌POLD1基因表达的初步研究

探讨氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)通过影响POLD1基因启动子甲基化率及调节转录调控因子p53和E2F的特异性结合对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.该研究采用CCK8,焦磷酸测序,RT-PCR,Western blot等技术方法论证了NC通过影响POLD1基因启动子甲基化率,间接调控POLD1基因转录活性,从而降低了DNA聚合酶ε的合成效率,抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖.不同剂量的NC(0.5,1.0,2.0 mg/mL)处理肝癌细胞SMMC-7721 48 h后,细胞增殖抑制率逐渐增大,分别为21.1％,35.2％,92.1％,呈明显的剂量依赖性.POLD1基因启动子的甲基化水平整体上升.经方差分析,与对照组相比,1.0,2.0 mg/mL实验组的E2F结合位点甲基化率随浓度增加而增高(F=10.21,P＜0.05),差异有统计学意义,0.5 mg/mL实验组与对照组相比无明显差异(P =0.694).而p53结合位点甲基化率随NC浓度增加呈下降趋势,实验组与对照组有明显差异(F =9.76,P ＜0.05),其中2.0 mg/mL实验组有显著差异(P＜0.01).实验组POLD1 mRNA和蛋白p125随NC浓度增加而下降,采用秩和检验,x2分别为40.19,36.65,P＜0.05,1.0、2.0 mg/mL实验组与对照组相比,差异有统计学意义.结果显示氯化两面针碱可能通过调节SMMC-7721细胞POLD1基因的甲基化水平,影响其启动子转录调控因子的作用,从而抑制了POLD1基因表达,降低DNA聚合酶ε活性,抑制肝癌细胞增殖的作用.