SEC-HPLC法测定CN10冻干品中CN10的蛋白含量

通过高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定CN10冻干品中蛋白含量的方法.以0.1 mol/L Tris-HC1、0.1 moL/L NaC1、pH7.2缓冲液作为流动相,色谱柱为TSK2000SWxl(4.6 mm ×250 mm)凝胶过滤色谱柱,体积流量为0.65 mL/min,进样体积50 μL,检测波长选择280 nm,依据HPLC外标法原理建立CN10含量测定方法,并根据《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》对方法进行相关验证.结果:在该条件下,CN10和人血白蛋白之间有良好的分离度,CN10浓度在0.1～0.6 mg/mL的范围内与其峰面积呈良好的线形关系(R2 =0.998 1),最低检出限和最低定量限分别0.01 mg/mL和0.04 mg/mL,方法的重复性RSD(％)为0.38,平均回收率为(100.40±2.28)％.用该方法检测CN10冻干制剂中的CN10蛋白含量时,不受人血白蛋白的影响,具有较高的准确性和专属性.