LC-MS/MS法测定大鼠胆汁中15种胆汁酸成分

建立了同时测定大鼠胆汁中15种胆汁酸组分[游离型胆汁酸胆酸(CA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、熊去氧胆酸(UDCA)、去氧胆酸(DCA)、石胆酸(LCA),牛磺胆酸、甘氨胆酸及牛磺胆酸和甘氨胆酸与CDCA、UDCA、DCA和LCA的结合型]的高效液相色谱-串联质谱联用方法.由于胆汁中各胆汁酸浓度较高且内源性成分复杂,因此首先需将胆汁进行稀释,并采用分阶段检测,在提高检测灵敏度的同时,能够减少基质效应对测定的影响.采用XTerra RP18色谱柱进行色谱分离,流动相为10 mmol/L乙酸铵溶液:乙腈,梯度洗脱;采用电喷雾离子源,于负离子模式下进行两阶段多反应检测.胆汁中15种胆汁酸成分能够在30 min内完成基线分离,最低定量限达到1 ng/ml.批内和批间RSD均＜15％,低、中、高浓度质控胆汁样本的基质效应在86.28％～114.38％,提取回收率在85.32％～114.95％.以该方法同时测定正常Wistar大鼠胆汁中的胆汁酸谱,结果显示牛磺酸结合型胆汁酸是胆汁中的主要胆汁酸组分.