过表达FGFR2重组HEK293细胞株的构建和鉴定
Chinese Journal of Pharmaceuticals（2017）
摘要
构建含有成纤维细胞生长因子受体蛋白2 (FGFR2)基因序列的重组慢病毒表达载体,与慢病毒包装质粒共转染包装细胞293T,获得过表达FGFR2的重组病毒颗粒;用重组病毒颗粒感染人胚肾细胞(HEK) 293细胞,并用嘌呤霉素(20 μg/ml)进行筛选,最终获得过表达FGFR2的重组细胞株.蛋白质免疫印迹(Western Blot)试验结果显示,该重组细胞株与空白对照HEK293细胞相比能高表达FGFR2,实时荧光定量核苷酸扩增试验(QPCR)和酶联免疫反应(ELISA)检测结果表明FGFR2蛋白下游相关通路的uPA等分子的转录和分泌水平上调,克隆形成试验也证实重组HEK293细胞促增殖能力增强.结果表明,该重组过表达FGFR2的细胞模型可用于下一步的功能研究以及靶向FGFR2药物的筛选.
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