冻融法控制制药用转基因蓝藻在环境中释放

目的 用转基因生物制备重组药物中的1个关键问题就是防止其环境释放.为控制制备抗对虾白斑综合征病毒用的转vp28基因鱼腥藻7120蓝藻细胞在应用中的生长和繁殖能力,本研究探讨用冻融法在不破坏重组VP28蛋白活性的同时杀灭藻细胞.方法 通过把蓝藻细胞在2种低温环境(-20、-80℃)和室温中处理,选取最适温度以多次冻融法破坏藻细胞.用液体和固体培养观察其后续生长,用光学和扫描电镜检测细胞的损伤.结果-20和-80℃与室温处理连用,都可使处理的藻细胞失去生长能力.为操作简便,选用冷冻温度为-20℃、反复冻融3次(24 h/次),使蓝藻细胞100％失去繁殖能力,藻细胞在冻融处理后丝状体断裂,细胞遭破坏,固体培养发现无藻细胞生长,蛋白印迹法检测VP28蛋白无丢失.结论 冻融法可控制转基因鱼腥藻在环境中的释放.该方法成本低廉、操作简单,且无次生污染,既保障该药物在应用中的安全性,也可为其他转基因蓝藻在环境中的安全释放提供借鉴.