结核分枝杆菌重组融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3诊断结核病

目的：重组表达结核分枝杆菌融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3，分析其诊断结核病的价值。方法：重组 PCR扩增 TB10.4-Hsp16.3融合基因，克隆至 pMD18-T 载体，测序鉴定后，亚克隆至原核表达载体 pET28a（+），PCR 和双酶切鉴定阳性重组子，将重组 DNA 转化 E.coli BL21，筛选阳性菌株，经 IPTG 诱导表达融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3，超声裂解菌体，对包涵体进行变性溶解和复性，金属螯合层析纯化，Western blot 分析其免疫学活性，ELISA 评价其诊断结核病的价值。结果：成功获得约750bp 的融合基因 TB10.4-Hsp16.3，构建了融合蛋白的重组表达质粒 pET-TB10.4-Hsp16.3，表达、纯化获得分子量约29kDa 的融合蛋白，能被结核病患者血清特异识别；其 ELISA 诊断结核病的灵敏度为89.3％，特异度为90.7％，阳性预测值为90.9％，阴性预测值为89.1％，诊断效率达90.0％。结论：成功表达可用于结核病诊断的结核分枝杆菌融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3。