结核分枝杆菌重组融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3诊断结核病
wf(2016)
Abstract
目的:重组表达结核分枝杆菌融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3,分析其诊断结核病的价值。方法:重组 PCR扩增 TB10.4-Hsp16.3融合基因,克隆至 pMD18-T 载体,测序鉴定后,亚克隆至原核表达载体 pET28a(+),PCR 和双酶切鉴定阳性重组子,将重组 DNA 转化 E.coli BL21,筛选阳性菌株,经 IPTG 诱导表达融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3,超声裂解菌体,对包涵体进行变性溶解和复性,金属螯合层析纯化,Western blot 分析其免疫学活性,ELISA 评价其诊断结核病的价值。结果:成功获得约750bp 的融合基因 TB10.4-Hsp16.3,构建了融合蛋白的重组表达质粒 pET-TB10.4-Hsp16.3,表达、纯化获得分子量约29kDa 的融合蛋白,能被结核病患者血清特异识别;其 ELISA 诊断结核病的灵敏度为89.3%,特异度为90.7%,阳性预测值为90.9%,阴性预测值为89.1%,诊断效率达90.0%。结论:成功表达可用于结核病诊断的结核分枝杆菌融合蛋白 TB10.4-Hsp16.3。
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Key words
Mycobacteria tuberculosis,TB10.4-Hsp16.3,expression,Tuberculosis
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