miR-125b在小鼠白内障模型与人晶状体上皮细胞凋亡模型中的调控作用

目的 研究在紫外线诱导的小鼠白内障模型与人晶状体上皮细胞凋亡模型中微小RNA-125b(miR-125b)靶向调控BAK1的作用机制.方法利用LipofectamineTM RNAiMAX分别转染miR-125b模拟物(mimic)、模拟物阴性对照(mimic control)、miR-125b抑制物(inhibitor)、抑制物阴性对照(inhibitor control)至人晶状体上皮细胞系SRA01/04,分别上调和下调细胞中miR-125b的表达,48 h后用紫外线UVB(360μW/cm2)照射25 min,构建细胞凋亡模型.用UVB(360μW/cm2)照射小鼠左眼,制作白内障模型,收集小鼠晶状体囊膜.用实时qPCR验证转染效率,并检测miR-125b及其预测靶基因BAK1 mRNA的表达.用Western blotting检测BAK1蛋白的表达,用TUNEL凋亡检测法检测人晶状体上皮细胞凋亡率.结果与正常人晶状体上皮细胞比较,人晶状体上皮细胞凋亡模型中miR-125b的表达显著降低,BAK1表达显著升高,细胞凋亡增加;与转染miR-125b mimic control组相比,转染miR-125b mimic组miR-125b的表达显著增高,BAK1表达显著降低,细胞凋亡减少;与转染miR-125b inhibitor control组相比,转染miR-125b inhibitor组miR-125b的表达显著降低,BAK1表达显著升高,细胞凋亡增加.与未照射组相比,紫外线UVB照射组小鼠晶状体囊膜组织中miR-125b的表达显著降低,BAK1表达显著升高,细胞凋亡增加.结论miRNA-125b可能通过靶向调控BAK1影响人晶状体上皮细胞凋亡,从而调控白内障发病,可能成为非手术靶向治疗白内障的新方法.