小鼠视网膜内Spata7基因敲除模型构建及其光感受器细胞凋亡机制的研究
Journal of China Medical University(2020)
摘要
目的 构建小鼠Spata7基因视网膜内敲除模型,探讨Spata7基因突变导致光感受器细胞凋亡的机制.方法 以腺相关病毒(AAV)为载体搭载CRISPR/Cas9系统,注射1μL AAV病毒混合液(3×1013 vg/mL)于出生14 d小鼠视网膜中,对Spata7基因进行视网膜内特异性敲除.1个月后行视网膜眼底照相观察AAV感染效率;定量PCR测定敲除效率;视觉电生理检测光感受器细胞功能;免疫荧光实验探究Spata7基因功能.结果 AAV有效搭载CRISPR/Cas9系统进入视网膜内并对Spata7基因进行敲除,敲除效率为54%.小鼠光感受器细胞大量死亡,导致整体光感受器细胞功能明显下降.敲除后,视紫红质无法被转运到光感受器细胞外节,引起明显的内质网应激.结论 Spata7基因敲除导致视紫红质蛋白运输到外节受阻而停留在内质网,并造成内质网应激,是导致光感受器细胞大量死亡的重要原因.
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