外源性硫化氢对肝癌细胞系HepG2自噬的影响

目的：探讨外源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2 S）对肝癌细胞系HepG2细胞自噬的影响及其机制。方法应用外源性H2 S供体———硫氢化钠（sodium hydrosulfide，NaHS）处理HepG2细胞，采用Western blotting方法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（microtubule-associated light chain 3-Ⅱ，LC3-Ⅱ）表达变化，Real-time PCR方法检测自噬相关基因beclin1和atg5的mRNA表达浓度，免疫荧光方法观察HepG2细胞自噬颗粒变化、凋亡相关蛋白M30及凋亡小体变化，AnnexinV／PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果瞬时转染绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）-LC3质粒后，发现NaHS处理组HepG2细胞内GFP-LC3Ⅱ绿色荧光斑点明显增加，M30阳性细胞率[（8.37±1.03）％]，与对照组[（2.14±0.69）％]比较差异有统计学意义（P＜0.05）；同时，高倍镜下观察结果显示，NaHS处理后细胞核异染色质明显增加，凋亡小体形成。AnnexinV-FITC／PI双染结果显示NaHS处理组细胞凋亡率高于对照组[（16.32±0.28）％vs（0.67±0.09）％]，差异有统计学意义（P＜0.05）。Real-time PCR显示NaHS可增加HepG2细胞beclin1和atg5 mRNA表达水平，LC3-Ⅱ表达明显增加。且自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）可降低NaHS所致的beclin1和atg5的mRNA表达。结论外源性硫化氢能够上调自噬相关基因beclin1和atg5表达，进而促进HepG2细胞发生自噬，并诱导细胞凋亡。