TC-1癌蛋白高表达促进人BT549乳腺癌细胞迁移

目的:构建甲状腺癌基因-1(TC-1)真核表达质粒,观察TC-1癌蛋白高表达对人乳腺癌细胞迁移的影响.方法:用蛋白质印迹方法检测TC-1癌蛋白在培养的人MCF-7和BT549乳腺癌细胞中表达;从MCF-7细胞中提取总RNA,通过实时PCR(RT-PCR)扩增人TC-1 cDNA全长开放读码框架(ORF),并插入真核表达栽体Flag-pcDNA3.0中构建Flag-TC-1-pcDNA3.0重组质粒;经限制性内切酶和DNA测序鉴定后,该重组质粒用于转染BT549细胞,进行蛋白质印迹分析鉴定Flag-TC-1融合蛋白表达;进行细胞划痕实验,观察TC-1对BT549细胞迁移的影响.结果:TC-1蛋白在人MCF-7乳腺癌细胞中显著表达,而BT549细胞中表达极低;人MCF-7乳腺癌细胞TC-1全长ORF的RT-PCR产物为337 bp;重组质粒Flag-TC-1-pcDNA3.0经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切出现特征性的327 bp片段;DNA测序证实TC-1全长ORF序列正确无误,以正确的阅读框架插入Flag-pcDNA3.0载体中.蛋白质印迹结果显示该重组质粒转染的BT549细胞表达的Flag-TC-1融合蛋白可被抗Flag抗体特异性识别,分子质量约为13.6 kDa,符合预期;划痕实验结果显示,高表达TC-1的BT549细胞迁移性增加.结论:内源性TC-1蛋白在人BT549乳腺癌细胞中表达极低,Flag-TC-1融合蛋白高表达促进BT549细胞迁移.