粉防己碱通过NF-κB和MAPK信号通路影响人滑膜细胞炎症及对类风湿性关节炎治疗作用研究

目的:探讨粉防己碱对滑膜炎的作用及对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用.方法:体外建立白细胞介素(IL)-1β诱导的人滑膜炎细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性;将细胞分为NC组、IL-1β组、IL-1β+粉防己碱(5μmol/L)组、IL-1β+粉防己碱(10 μmol/L)组和IL-1β+粉防己碱(20μmol/L)组,用不同浓度的粉防己碱(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L)处理2h,然后用IL-1β(20 ng)刺激细胞6h,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测细胞上清IL-6、IL-8、TNF-α含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中p-p65/p65、p-Iκ Bα/IκBα、p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK的蛋白表达水平;体内建立胶原诱导型类风湿性关节炎(CIA)小鼠模型,将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、粉防己碱低、中、高剂量组(浓度分别为7.5 mg/kg、15 mg/kg、30 mg/kg)检测小鼠关节肿胀度和关节炎指数;采用苏木精一伊红(HE)和番红固绿染色法检测小鼠关节组织的病理学变化.结果:与NC组比较,IL-1β组细胞IL-6、IL-8、TNF-α含量以及p-p65/p65,p-IκBα/IκBα,p-ERK/ERK,p-p38/p38,p-JNK/JNK的蛋白表达增加(P＜0.05);与IL-1β组比较,粉防己碱低、中、高组(浓度分别为5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L)细胞IL-6、IL-8、TNF-α含量以及p-p65/p65、p-IκBα/IκBα、 p-ERK/ERK、 p-p38/p38及p-JNK/JNK的蛋白表达下降(P＜0.05).与假手术组比较,模型组小鼠的关节肿胀度和减小关节炎评分增加,同时炎性细胞浸润关节组织和软骨基质降解和损坏(P＜0.05);与模型组比较,粉防己碱各剂量组小鼠的关节肿胀度和减小关节炎评分降低,同时炎性细胞浸润关节组织和软骨基质降解和损坏缓解(P＜0.05).结论:粉防己碱能够抑制滑膜炎的发生,并且可能与抑制NF-κB和MAPK信号介导的促炎细胞因子释放有关,同时粉防己碱对RA具有潜在的治疗价值.