梅毒螺旋体粘附素Tp0751重组菌影的构建与鉴定

目的：构建梅毒螺旋体(Tp)粘附素Tp0751的重组大肠埃希菌菌影(E.coli bacterial ghosts,EBG),为深入评价其在抗Tp感染中的潜在免疫保护作用奠定基础。方法将含有噬菌体PhiX174裂解基因E的质粒pHH43转化E.coli DH5α,42℃温控诱导使其形成EBG并计算裂解效率,用琼脂糖DNA电泳和透射电镜( TEM)鉴定EBG。构建含有裂解基因盒E-box、膜锚定序列E′-linker及Tp0751目的基因的原核双表达重组质粒pET28a-E′-Tp0751-E-box,28℃诱导重组E.coli BL21表达Tp0751并用Western Blot鉴定；42℃诱导形成重组EBG(rEBG),计算裂解效率并用DNA电泳和TEM鉴定。结果构建的EBG裂解率为98.13％,DNA电泳未观察到DNA条带, TEM显示绝大部分细菌都裂解成缺乏胞浆成分的细胞空壳并保持活菌基本形态。 rEBG在28℃时高效表达重组Tp0751蛋白,且仅与梅毒患者血清特异性结合；42℃下其rEBG裂解率为96.37％,电泳和TEM鉴定结果与EBG的相似。结论成功构建表达Tp粘附素Tp0751的rEGB,其所表达目的蛋白具有良好免疫反应性。