人源S100A8重组质粒的构建及其对他莫昔芬治疗乳腺癌的影响

目的 构建人源S1000A8的重组质粒,并在人乳腺癌细胞MCF7中表达,初步探索其对他莫昔芬处理下MCF7细胞的影响.方法 设计合成针对人源S100A8基因cds区的引物序列,采用PCR的方法以人乳腺癌细胞MCF7的cDNA为模板,扩增目的基因S100A8,经过NdeⅠ和BamHⅠ双酶切后,克隆至pCMV5-myc质粒上.通过脂质体转染至MCF7细胞中,应用Western Blot法检测其蛋白表达.脂质体转染S100A8至MCF7细胞并应用他莫昔芬处理后,用MTT法检测其细胞活力,Western Blot法检测相关蛋白表达.结果 酶切鉴定证明S100A8基因重组质粒构建成功,并且可以在MCF7细胞中过表达.MTT法显示S100A8可以部分逆转他莫昔芬所造成的细胞活力下降,部分抗凋亡分子表达上升.结论 人源S100A8基因的重组质粒构建成功,为进一步研究S100A8在乳腺癌对他莫昔芬发生耐药的过程中的作用奠定了基础.