缺氧损伤对人脐静脉内皮细胞抗氧化能力、Ca2+依赖的三磷腺苷酶活性、Ca2+浓度及线粒体膜电位的影响

目的 探讨缺氧损伤对离体培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)抗氧化能力、Ca2依赖的三磷腺苷酶(Ca2+-ATPase)活性、线粒体膜电位(MMP)和细胞内Ca2+浓度等的影响.方法 将ECV304细胞分为正常组和缺氧组.正常组用无血清培养基培养,缺氧组用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)孵育ECV304细胞5h,建立缺氧损伤模型.倒置显微镜下观察2组细胞形态的变化,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡、细胞内Ca2+浓度及MMP的变化,化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)分泌量及Ca2+-ATPase活性.结果 正常组细胞贴壁良好,细胞饱满、排列紧密,透明度好;缺氧组细胞出现皱缩,细胞间排列疏松、紊乱.缺氧组细胞吸光度值为0.91 ±0.12,低于正常组的1.30 ±0.25(P ＜0.05).缺氧组G0/G1期细胞所占比例为(88.53±1.36)％,高于正常组的(81.27±0.25)％(P＜0.05);S期细胞所占比例为(5.17±0.21)％,低于正常组的(6.07±0.25)％(P＜0.05);缺氧组细胞凋亡率为(19.75±0.81)％,高于正常组的(9.83±1.77)％(P＜0.05).正常组MDA、GSH含量,一氧化氮(NO)分泌量,SOD、Ca2+-ATPase活性分别为(0.40±0.23)、(3.85 ±0.18)、(14.21±0.39)μmol·L-1、(64.61±0.05) ×103 U·L-1、(18.90±1.09)U·mgprot-1;缺氧组以上各指标分别为(1.65±0.24)、(3.34 ±0.13)、(78.70±5.29) μmol·L-1、(35.33±0.04)×103 U·L-1、(5.80±0.31)U·mgprot-1;与正常组相比,缺氧组细胞SOD活性、GSH含量及Ca2+-ATPase活性均降低,MDA含量增加,NO分泌量升高(P＜0.05).缺氧组细胞内Ca2+荧光强度为(572.82±49.40)％,高于正常组的(505.97±19.40)％(P＜0.05).缺氧组细胞MMP为(182.07±6.00)％,低于正常组的(217.60±16.40)％(P＜0.05).结论 Na2S2 O4作用于ECV304细胞引起细胞缺氧损伤,其机制可能与MMP降低、细胞内Ca2+浓度升高和细胞抗氧化能力及Ca2+-AT-Pase活性减弱相关.