广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

目的 通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品.方法 提取广地龙及其混伪品的DNA.利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序.通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定.对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察.结果 COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750 bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品.通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r.在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带.结论 设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法.