miRNA-34a基因敲除DBA1/J小鼠的建立

目的:利用CRISPR/Cas9技术,构建全基因组微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)基因敲除DBA1/J小鼠,并进行繁殖、鉴定.方法:根据CRISPR/Cas9原理,构建出miR-34a-/+DBA1/J鼠为F0代小鼠;将其与DBA1/J野生型小鼠进行杂交,通过PCR鉴定筛选出基因型为miR-34a-/+的F1小鼠;筛选miR-34a-/-的F2代小鼠,分析其生长特性、繁殖能力;通过流式细胞术检测小鼠体内免疫器官和外周血中T、B淋巴细胞比例.结果:获得2只F0代小鼠,4只F1代小鼠,5只F2代小鼠;与DBA1/J小鼠比较,miR-34a-/-DBA1/J小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群比例没有显著变化(P>0.05),但B淋巴细胞比例明显增加(P<0.05);未发现miR-34a-/-DBA1/J小鼠的体重、繁殖能力有明显的改变(P>0.05).结论:通过CRISPR/Cas9技术成功敲除miR-34a基因并繁殖获得目的小鼠.