丙型肝炎病毒核心蛋白与NS4B融合蛋白的构建和表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(core)与NS4B融合表达克隆,并在大肠埃希菌中表达.方法:应用PCR方法从抗HCV阳性血清中扩增出HCV核心蛋白基因和NS4B基因的cDNA片段,将两部分基因片段拼接成一条完整cDNA,连接到表达载体pET28a上,菌落PCR和测序方法选择阳性核心蛋白-NS4B-pET28a重组质粒.将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BI21中进行表达,分别用SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表达的重组融合蛋白.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,成功获得核心蛋白基因和NS4B基因,并成功拼接成一条完整cDNA;菌落PCR和测序结果表明重组融合克隆核心蛋白-NS4B-pET28a构建成功.SDS-PAGE结果表明重组融合质粒在大肠埃希菌BL21中成功表达,蛋白质印迹结果显示表达的重组蛋白与抗HCV阳性血清具有反应性.结论:成功构建了HCV核心蛋白与NS4B的重组融合克隆,并成功在大肠埃希菌中表达.