干扰乳酸脱氢酶A表达对肝癌HepG2细胞增殖与迁移的影响

目的:观察靶向乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝癌HepG2细胞系的干扰效率及其对细胞增殖与迁移的影响.方法:设计合成LDHA及对照eGFP shRNA序列,克隆至真核表达质粒pLKO.1-TRC,质粒抽提纯化后测序鉴定.重组质粒用脂质体转染肝癌细胞系,采用反转录(RT)-PCR和免疫印迹检测LDHA的表达,验证shRNA的干扰效率.采用CCK-8和克隆形成实验检测干扰LDHA后细胞增殖的变化,划痕实验检测干扰LDHA对细胞迁移的影响.结果:成功构建针对LDHA和对照eGFP的shRNA表达质粒.与转染sh-eGFP组相比,转染sh-LDHA组HepG2细胞中LDHA mRNA和蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05).与sh-eGFP组相比,sh-LDHA组72,96 h细胞增殖明显降低,克隆形成数减少,细胞迁移距离短(P均＜0.05).结论:LDHA的干扰质粒能有效干扰LDHA在肝癌HepG2细胞中的表达,明显抑制HepG2细胞的增殖活力和迁移能力.