HBx基因通过ERK1/2信号通路促肝细胞增殖及炎性因子表达

目的 利用稳定表达HBx基因的小鼠动物模型探讨HBx基因在体内对肝脏细胞周期和肝脏炎症活动的影响.方法 利用携带HBx基因的慢病毒感染肝前体细胞14-19,小鼠肝门静脉注射经改造的肝前体细胞以构建表达HBx基因的小鼠模型.利用qRT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测肝内HBx基因的mRNA和蛋白表达情况.建模后180 d检测小鼠肝组织的细胞周期调控因子CDK4和CyclinD1,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的mRNA和蛋白表达水平以及ERK1/2信号转导通路成员ERK1/2和MEK1/2的蛋白表达水平.HE染色观察HBx基因是否引起肝组织病理变化.结果 稳定表达HBx基因的小鼠模型构建成功.与生理盐水组和EGFP-14-19组相比,小鼠肝脏组织在转入HBx 180d后HBx显著上调CDK4,CyclinD1,TNF-α的mRNA表达水平(P＜0.01),同时显著上调CDK4,CyclinD1,TNF-α蛋白水平;HBx显著下调IL-10的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05).HBx显著激活ERK1/2信号转导通路.给予ERK1/2信号通路抑制剂U0126后,与对照组相比,实验组CDK4和CyclinD1,TNF-α的mRNA表达水平显著下调(P＜0.05);同时,CDK4和CyclinD1,TNF-α蛋白水平显著下调,IL-10的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P＜0.01).HE染色结果显示小鼠肝脏组织在转入HBx 180d后肝脏组织明显病变.结论 HBx通过激活ERK1/2信号通路促进肝细胞增殖,与肝脏炎症有关.