沉默NUPR1降低人多发性骨髓瘤U266细胞自噬并促进其迁移和侵袭

目的 探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤细胞自噬、迁移和侵袭的影响及其机制.方法 用含有NUPR1-shRNA慢病毒载体的病毒感染骨髓瘤U266细胞,通过流式细胞术检测转染效率,实验分为阴性对照组(转染无关序列shRNA慢病毒)和敲低组(转染NUPR1-shRNA慢病毒).qRT-PCR检测NUPR1 mRNA表达,Western b1ot检测NUPR1、自噬相关蛋白(LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、Beclin1、ATG5和P62)、迁移和侵袭相关蛋白(MMP9、CXCR4)以及通路蛋白(p-AKT/T-AKT和p-mTOR/T-mTOR)的表达;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力.结果 与阴性对照组比较,敲低组NUPR1 mRNA和蛋白表达显著下调(P＜0.05),自噬相关蛋白ATG5、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的表达明显降低(P＜0.05),而MMP9、CXCR4、P62、p-AKT/T-AKT和p-mTOR/T-mTOR蛋白表达明显增高(P＜0.05);敲低组自噬小体明显减少,细胞迁移和侵袭能力增强,雷帕霉素可阻断该促进作用.结论 沉默NUPR1可能通过降低自噬水平促进U266细胞迁移和侵袭,并可能与AKT/mTOR通路激活有关.