两条肿瘤靶向抑制肽的修饰及作用靶点的初步研究

目的 探讨两条肿瘤靶向抑制肽(QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS)经化学修饰后(N端乙酰化、C端酰胺化)的稳定性,并初步探讨其作用靶点.方法 3H-TdR掺入法、CCK-8法分别探讨多肽修饰前后对A549细胞增殖、活力的影响;高效液相色谱法(HPLC)测定多肽在10％血清条件下,不同时间点(12、24 h)的剩余量,评价其修饰前后在血清中的稳定性;构建GST标签的多肽(GST-多肽)融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中诱导表达、纯化;免疫共沉淀法鉴定GST-多肽融合蛋白能否与VEGFR-1、VEGFR-2结合.结果 多肽RKRKRKKSRYIVLS经化学修饰后在10％血清环境下对A549细胞增殖的抑制率由(2.63±6.19)％提高至(48.50±7.14)％(P＜0.01),对A549细胞活力的抑制率由(1.30±7.90)％提高至(20.80±5.90)％(P＜0.01),24 h后多肽在血清中的剩余量由(56.04±1.81)％提高至(64.64±0.30)％(P＜0.01);多肽QKRKRKKSRKKH化学修饰前后在10％血清环境下对A549细胞增殖的抑制率分别为(28.38±5.63)％、(34.25±10.90)％ (P ＞0.05),对A549细胞活力的抑制率分别为(8.09±5.84)％、(15.07±8.09)％ (P ＞0.05),24 h后多肽在血清中的剩余量由(72.72±2.60)％提高至(77.43％±1.78)％(P＜0.05);免疫共沉淀表明这两条多肽均能与VEGFR-1、VEGFR-2结合.结论 VEGFR-1、VEGFR-2为这两条肿瘤靶向抑制肽的作用靶点;多肽RKRKRKKSRYIVLS、QKRKRKKSRKKH修饰后在血清环境下稳定性明显提高,修饰后的RKRKRKKSRYIVLS对A549细胞增殖及活力的抑制能力明显增强.