miR-335对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的 检测microRNA-335(miR-335)在乳腺癌细胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达以及在原发性乳腺癌和淋巴结转移性乳腺癌中的表达,进一步研究miR-335对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用荧光实时定量PCR检测miR-335在乳腺癌细胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达,以及在原发性乳腺癌和淋巴结转移性乳腺癌中的表达.体外培养MDA-MB-231细胞并将其分3组,分别为miR-335组、阴性对照组和空白对照组.miR-335组转染miR-335模拟物(has-miR-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染.通过MTT实验检测过表达miR-335对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测过表达miR-335对细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对细胞迁移能力的影响.Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达.结果 各乳腺癌细胞系中miR-335表达水平均低于乳腺正常上皮细胞系MCF-10A,MDA-MB-231细胞中最低(P＜0.01).在随机配对的10例原发性乳腺癌和10例淋巴结转移性乳腺癌标本中,有7例淋巴结转移性乳腺癌中MiR-335的表达低于对应的原发性乳腺癌(P＜0.05).过表达miR-335对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡无明显影响(P＞0.05),但能显著抑制细胞的迁移能力(P＜0.05).Western blot结果显示:miR-335组MMP-2和MMP-9蛋白的表达量均低于阴性对照组和空白对照组.结论 miR-335在高转移性乳腺癌细胞系和淋巴结转移性乳腺癌组织中明显低表达,过表达miR-335对MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡无明显影响,但抑制MDA-MB-231细胞的迁移能力.miR-335可能通过下调MMP2和MMP9的表达从而抑制MDA-MB-231细胞迁移.