人骨髓间充质干细胞的分离、培养和体外定向诱导成类软骨细胞的实验研究

目的 建立一种体外分离培养、纯化扩增人骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,一定条件下诱导人MSCs定向分化成软骨细胞,为组织工程提供软骨种子细胞.方法 用单纯的贴壁培养法与密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化成年人MSCs;体外加自行配制软骨诱导剂,诱导2、4、6代MSCs细胞14d做免疫细胞化学比较;取2代MSCs不同浓度TGF-β1(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml),诱导14d做免疫细胞化学比较.结果 软骨诱导后2、4、6代MSCs均表达Ⅱ型胶原,无显著性差异;不同浓度TGF-β1诱导2代MSCs,均表达Ⅱ型胶原,其中10ng/ml组和20ng/ml组Ⅱ型胶原呈强阳性.结论 不同代的MSCs诱导率无明显差异;TGF-β1浓度为5ng/ml组Ⅱ型胶原弱阳性,不适合作为组织工程种子细胞;诱导软骨TGF-β1最适浓度为10ng/ml、20ng/ml.