细粒棘球绦虫PI3K P110亚基酪氨酸激酶区蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

目的：制备细粒棘球绦虫 PI3K P110亚基酪氨酸激酶区（EgPI3K P110RTK）蛋白的多克隆抗体，为进一步研究 EgPI3K P110蛋白的功能提供检测抗体。方法将 EgPI3K P110RTK（1-352 aa）基因序列克隆至原核表达载体 pGEX-4T-1，转化 E．coliROSETTA（DE3）株，IPTG 诱导蛋白表达，以 GST 亲和层析纯化 EgPI3K P110RTK蛋白，免疫家兔，收集免疫血清，采用 ELISA 法测定抗体效价，Western blotting 检测所制备抗体与EgPI3K P110RTK蛋白的反应性。结果经0．8 mmol／L IPTG诱导，表达出约66 ku的 EgPI3K P110RTK重组蛋白，制备获得效价在5．12×105以上的多克隆抗体，该抗体能够与 EgPI3K P110RTK重组蛋白发生特异性反应。结论成功制备获得兔抗 EgPI3K P110亚基多克隆抗体，为研究 EgPI3K激酶在 Eg中的功能和作为药物靶标等研究奠定基础。