软骨组织工程软骨细胞分离方式的优化

目的：探讨不同软骨分离方法获得软骨细胞的细胞存活率及细胞数量，优化软骨细胞获取方法。方法采用 SD 大鼠20只，获取关节软骨，机械剪碎后称重，每组使用相同重量的软骨组织（1 g），4组采用不同方法获取软骨细胞：实验1组：0．25％胰蛋白酶消化3 h，0．2％Ⅱ型胶原酶消化10 h。实验2组：4℃下0．25％胰蛋白酶消化12 h，0．25％胰蛋白酶消化72 h。实验3组：0．2％Ⅱ型胶原酶消化16 h。实验4组：0．08％Ⅱ型胶原酶消化12 h。加入原代细胞培养液进行体外培养增殖。使用化学特殊染色法鉴定获取细胞是否为软骨细胞。计算每组软骨细胞存活率及细胞数。结果经过4种方法消化细胞，所获得细胞在外形上无明显差异，细胞均呈四方形，甲苯胺蓝染色鉴定所获取细胞为软骨细胞。细胞存活率：实验1组：原代（P0）为（79．6±2．1）％，一代（P1）为（78．6±8．4）％，三代（P3）为（82．7±2．1）％。实验2组：P0为（81．0±6．9）％，P1为（80．7±3．5）％，P3为（85．0±3．0）％。实验3组：P0为（84．7±4．0）％，P1为（85．3±1．2）％，P3为（89．7±2．5）％。实验4组：P0为（82．0±2．6）％，P1为（79．0±7．8）％，P3为（86．3±2．5）％，实验3组的细胞存活率明显高于其他3组，差异具有统计学意义（P ＜0．05）。活细胞数：实验1组（364776±81743）个，实验2组（306111±49768）个，实验3组（472580±42644）个，实验4组（361906±78405）个，实验3组的活细胞数明显高于其他3组，差异具有统计学意义（P 均＜0．05）。结论4种实验方法均能获取一定数量的软骨细胞，0．2％Ⅱ型胶原酶消化16 h 的方法在细胞存活率及细胞数量均高于其他方法，适合用于软骨组织工程中软骨细胞的获取。