泛素连接酶MuRF2抑制心肌细胞线粒体自噬

目的 观察泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(muscle ring finger protein2,MuRF2)在HL-1心肌细胞自噬中的作用.方法 采用慢病毒转染技术上调和下调HL-1心肌细胞中MuRF2的表达.实验分为阴性对照组、阳性对照组(空载病毒对照)、雷帕霉素处理组、MuRF2过表达组和MuRF2敲减组.用雷帕霉素处理细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬蛋白LC3和BNIP3的表达.透射电镜观察HL-1心肌细胞超微结构.结果 (1)Western blot验证,MuRF2过表达组中MuRF2蛋白表达水平均高于阴性对照组、阳性对照组、雷帕霉素处理组(P均<0.05),MuRF2敲减组中MuRF2蛋白表达水平均低于阴性对照组、阳性对照组、雷帕霉素处理组(P均<0.05).(2)Western blot结果 表明,雷帕霉素处理组LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均高于阴性对照组(P均<0.05),MuRF2过表达组LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均低于雷帕霉素处理组(P均<0.05).与阴性对照组相比,MuRF2敲减组的LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均升高(P均<0.05),雷帕霉素处理组和MuRF2敲减组在LC蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达上差异均无统计学意义(P均﹥0.05).透射电镜显示,雷帕霉素处理组线粒体分裂、碎片化,自噬体和自噬溶酶体散在胞质内.MuRF2过表达组线粒体处于融合状态,自噬体明显减少.结论 MuRF2可以抑制心肌细胞线粒体自噬.