人肝脏MST1相关miRNA的筛选、质粒构建与验证

目的 构建与人肝脏丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(MST1)表达相关的人源性miRNAs(hsa-miRNAs)的重组质粒并进行初步验证,为深入探讨其在肝脏脂代谢途径中的可能作用奠定基础.方法 通过TargetScan、miRDB等数据库并参照文献提供的数据库信息筛选出可能靶向人肝脏MST1的脂肪组织来源miRNAs,并通过Western blot和双荧光素酶报告基因实验进行筛选;进而改建miRNAs过表达载体骨架,并将筛选得到的miRNAs构建过表达载体,获得miRNA的过表达重组质粒;采用棕榈酸(PA)孵育人肝癌细胞株HepG2构建非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型,并验证miRNAs对NAFLD细胞模型内MST1表达的调控效应.结果 成功筛选出了靶向人肝脏MST1的miRNA:hsa-miR-448和hsa-miR-518a-3p,并构建了miRNAs过表达载体,在NAFLD细胞模型中验证了hsa-miR-448和hsa-miR-518a-3p过表达对脂代谢的影响.结论 初步筛选并验证了调节人肝脏MST1表达的人源性miRNAs.证实hsa-miR-448和hsa-miR-518a-3p过表达通过下调MST1及相关信号通路的关键蛋白进而影响NAFLD的进程.