基于CRISPR-Cas9技术构建gpr41基因敲除的RAW264.7细胞系

采用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建C-蛋白偶联受体41(gpr41)基因敲除的RAW264.7细胞系.利用慢病毒转染,构建稳定表达Cas9蛋白的巨噬细胞株.针对gpr41基因作用的功能区域,设计靶向gpr41基因的向导RNA(gRNA),构建pLenticrisprV2重组质粒转化DH5α感受态细胞,筛选出重组子测序验证gRNA的有效性.鉴定成功的pLenticrisprV2-gpr41-gRNA重组质粒采用转染试剂转染巨噬细胞系RAW264.7.筛选阳性单克隆细胞株,Western blot检测gpr41基因的表达.测序结果证实pLenticrisprV2-gpr41-gRNA重组质粒构建成功;Western blot筛选出重组质粒pLenticrisprV2-gpr41-gRNA3转染RAW264.7细胞13号单克隆株的GPR41蛋白不表达.利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建了gpr41基因敲除的巨噬细胞株,为研究gpr41基因在RAW264.7细胞中的作用机制奠定基础.