Smad4对HEC凋亡的影响及机制研究

目的 探讨胰腺癌缺失基因(DPC4 /Smad4)对增生期血管瘤内皮细胞(HEC) 凋亡的影响.方法 分离培养 HEC,在细胞中转染Smad4 真核表达载体,qRT-PCR 和Western blot 法检测转染后的细胞中Smad4 mRNA 及蛋白表达. MTT 法测定Smad4 对HEC 增殖的影响,流式细胞仪测定 Smad4 对HEC 周期和凋亡的影响,Western blot 法检测细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Cleaved Caspase-3)和细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白水平,二氯二氢荧光素- 乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测Smad4 对HEC 中活性氧(ROS) 水平的影响.结果 Smad4 真核表达载体能够促进HEC 中 Smad4 mRNA 和蛋白表达.过表达Smad4 后的HEC 增殖活性降低,G0 /G1 期细胞增多,细胞凋亡率也升高,细胞中 Cleaved Caspase-3 水平升高,细胞中CDK4、Cyclin D1 蛋白水平下降,细胞中ROS 水平升高,与正常培养的HEC 比较,差异有统计学意义(P < 0. 05).结论 Smad4 诱导HEC 凋亡,抑制HEC 增殖,阻滞细胞周期,机制与促进Caspase-3 活化并减少CDK4、Cyclin D1 蛋白表达,促进细胞合成ROS 有关.