miR-155-5p慢病毒载体的构建及其对正常胃上皮增殖的影响

目的 构建过表达miR-155-5p慢病毒表达载体,建立稳定过表达miR-155-5p的GES-1胃上皮细胞株.在细胞水平上观察细胞增殖能力的变化.方法 第一部分:PCR扩增获得miR-155-5p基因片段;将该基因片段与已线性化的病毒载体连接;将重组质粒转化到DH5α细胞,进行克隆分离、质粒DNA提取和DNA测序.第二部分:序列证实了的GV-369-has-miR-155-5p载体和pHelper 1.0以及pHelper2.0载体共同转染到293-T细胞,用于慢病毒的包装,然后进行慢病毒收获、浓缩与纯化.将纯化的miR-155-5p慢病毒用来感染细胞,经过嘌呤霉素筛选后建立稳定过表达miR-155-5p的GES-1细胞株.qRT-PCR检测细胞株中miR-155表达;Western blot检测KLF4蛋白表达及MTIT法检测稳定表达miR-155-5p细胞的增殖.结果 过表达miR-155-5p的重组慢病毒构建成功;miR-155在恶性程度较高的SGC-7901胃癌细胞株中高表达(P＜0.05);建立了miR-1556p稳定过表达的GES-1细胞株;过表达miR-155-5p抑制GES-1细胞中KLF4蛋白表达(P＜0.05),且促进细胞增殖.结论 miR-155可能通过负向调控KLF4表达,参与调控胃癌发生发展.