荧光共振能量转移法对细胞cAMP含量的实时检测
Acta Universitatis Medicinalis Anhui（2017）
摘要
大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)转染pcDNA3-ICUE3质粒,用荧光共振能量转移(FRET)法观察前列腺素(PGE2)刺激下大鼠FLS环磷酸腺苷(cAMP)水平的实时变化,与放免法检测进行比较.FRET检测到FLS在PGE2刺激后1 min,cAMP升高14.93％,且不同批次实验差异较小;放免法检测到cAMP升高7.79％;FRET可检测到PGE2受体拮抗剂对cAMP产生的抑制,可观察到1 nmol/L PGE2促进cAMP产生,放免法检测PGE2产生效应最低浓度为0.1μmol/L.提示FRET法检测灵敏、重复性高,为G蛋白偶联受体信号通路研究的可靠技术手段.
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关键词
fluorescence resonance energy transfer,cAMP,G protein coupled receptor,fluorescence probe,live cell research
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