不同 CHO工程细胞株表达的 VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究

目的：比较中国仓鼠卵巢细胞（ CHO ）工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异，为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量：酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1，2-diamino-4，5-methylenedioxybenzene （ DMB）衍生后，采用荧光－亲水保留液相色谱（ HILIC-FLD）检测。寡糖链的结构分析：糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺（2-AB）衍生后，一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数；一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3～12 mol NANA ／mol 蛋白之间，参考品 Aflibercept 为10.46 mol NANA ／mol蛋白；每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28～1.0之间；寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰，各样品、参考品均有以上共有峰，但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。