乙肝病毒HBx基因稳转细胞系的建立及其诱导的内质网应激

目的建立乙肝病毒( HBV) HBx基因稳转细胞系，并观察该细胞系的增殖活性及内质网应激相关基因的表达情况。方法采用 RT-PCR 法从 HepG2.2.15细胞株中克隆HBx基因编码区片段，构建pcDNA3.1-HBx真核表达质粒。利用脂质体将pcDNA3.1-HBx转染至人HepG2细胞系，通过G418筛选后，经Western blot法对HBx的表达进行验证。并用MTT法检测细胞的增殖活性，同时观察过表达HBx蛋白对内质网应激相关基因表达的影响。结果成功构建了HBx的真核表达质粒；建立了HBV HBx基因稳转细胞系；MTT法检测显示该细胞系增殖活性明显上升；同时也发现HBx基因的过表达可上调内质网应激相关基因 BiP、PERK、ATF6、XBP1、MANF的表达，而CHOP的表达降低。结论 HBx基因过表达可诱导内质网应激，并促进HepG2细胞增殖。