含有CRISPR序列的噬菌体耐受菌的筛选

人工设计合成规律成簇的间隔短回文重复( CRISPR)序列特异性引物,将从临床分离的大肠埃希菌株作为模板,采用PCR扩增方法筛选含有CRISPR系统的大肠埃希菌；利用噬菌斑法从医院未经消毒处理的污水中分离大肠埃希菌噬菌体,经过PEG沉淀的方法浓缩得到高滴度的噬菌体,再用该筛选噬菌体感染上述含有CRISPR的大肠埃希菌以筛选耐受该噬菌体的大肠埃希菌菌株。最后从70株大肠埃希菌中筛选到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分离到1株大肠埃希菌E. coli 147-30的裂解性噬菌体IME-EC1,在此基础上利用E. coli 147-30筛选到1株耐受噬菌体IME-EC1的大肠埃希菌菌株,命名为E. coli 147-30R1。