酵母双杂交技术筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS ANHUI（2007）
Abstract
目的 筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白,进一步探讨PALS1的功能及其分子机制.方法 将PALS1的全长cDNA序列克隆到载体pGBKT7中,重组的pGBKT7-PALS1质粒转入酵母AH 109细胞,细胞置于SD/-Trp培养基上生长,阳性细胞再用Hela细胞的cDNA文库质粒转化,生长于SD/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal,显蓝色的克隆为阳性.阳性克隆细胞中的DNA被抽提后转化细菌细胞,然后抽提DNA进行酶切分型.合适的类型测序后进行BLAST检索分析.结果 筛选到了13个阳性克隆,其中有2个是已知蛋白的基因即ATRAP和GLT28D1.结论 利用酵母双杂交系统成功克隆了PALS1的结合蛋白的基因,为进一步研究PALS1蛋白的功能提供了有益的启示.
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