七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤及其机制

目的:观察吸入麻醉药七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤,阐明七氟醚诱导脑神经毒性的可能机制.方法:HT22小鼠海马神经元细胞随机分为空白对照组、2％七氟醚组(2％Sevo 6 h组、2％Sevo 12 h组和2％Sevo 24 h组)、4％七氟醚组(4％Sevo 6 h组、4％Sevo 12 h组和4％Sevo 24 h组)和8％七氟醚组(8％ Sevo 6 h组、8％Sevo 12 h组和8％Sevo 24 h组),应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率.根据实验结果将细胞分为生理盐水组、生理盐水+4％Sevo 12 h组、生理盐水+8％Sevo 12 h组、N-乙酰半胱氨酸组(NAC组)、NAC+4％Sevo 12 h组和NAC+8％Sevo 12 h组.采用MTT法和LDH法分别检测NAC预处理后各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率;应用单细胞凝胶电泳检测各组HT22小鼠海马神经元细胞DNA双链断裂情况;Western blotting法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量;DCFH-DA法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中活性氧(ROS)水平.结果:与空白对照组比较,2％Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率差异无统计学意义(P＞0.05);4％Sevo组和8％Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低(P＜0.01),死亡率升高(P＜0.01).与4％Sevo组比较,同一时间8％Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低(P＜0.05),死亡率升高(P＜0.05).与4％Sevo 6 h组比较,4％Sevo 12 h组和4％Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低(P＜0.05),死亡率升高(P＜0.05);与4％Sevo 12 h组比较,4％Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低(P＜0.05),死亡率升高(P＜0.05).与8％ Sevo 6 h组比较,8％Sevo 12 h组和8％Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低(P＜0.05),死亡率升高(P＜0.05);与8％Sevo 12 h组比较,8％Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低(P＜0.05),死亡率升高(P＜0.05).与生理盐水组比较,生理盐水+4％Sevo 12 h组和生理盐水+8％Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞内DNA双链断裂增多,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量增加、ROS水平升高(P＜0.05).与生理盐水+4％Sevo 12h组比较,NAC+4％Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高(P＜0.01),死亡率降低(P＜0.01),细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低(P＜0.05);与生理盐水+8％ Sevo12 h组比较,NAC+8％Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高(P＜0.01),死亡率降低(P＜0.01),细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低(P＜0.05).结论:七氟醚能够通过诱导DNA损伤导致HT22小鼠海马神经元细胞死亡,其机制可能与诱导海马神经元细胞中ROS积聚有关.