抑制B7-H4表达对结直肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制

目的:探讨抑制B7-H4表达对结直肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和迁移的影响,阐明B7-H4在结直肠癌发生发展中的作用.方法:以脂质体法转染pSilencer4.1-B7-H4-shRNA和pSilencer4.1-scrambled shRNA载体至HT-29细胞,作为B7-H4 shRNA组和scrambled shRNA组.RT-qPCR法检测2组HT-29细胞中B7-H4 mRNA表达水平,Western blotting法检测2组HT-29细胞中B7-H4蛋白表达水平,CCK-8法检测2组HT-29细胞增殖活性,流式细胞术检测2组不同细胞周期HT-29细胞百分率和细胞凋亡率,Transwell实验检测2组迁移细胞数,ELISA法检测2组HT-29细胞上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,Western blotting法检测2组HT-29细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路前后HT-29细胞中B7-H4 mRNA表达水平,Western blotting法检测抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路前后HT-29细胞中B7-H4蛋白表达水平.结果:B7-H4 shRNA组HT-29细胞中B7-H4 mRNA和蛋白表达水平明显低于scrambled shRNA组(P<0.01).与scrambled shRNA组比较,B7-H4 shRNA组HT-29细胞增殖活性降低(P<0.05),G0/G1期和S期细胞百分率比较差异无统计学意义(P>0.05),细胞凋亡率和细胞中Casapse-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),HT-29细胞的迁移细胞数减少(P<0.01),MMP-2和MMP-9水平也明显降低(P<0.05).与对照组比较,LY294002组和雷帕霉素组HT-29细胞中B7-H4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05).结论:抑制B7-H4表达能够明显抑制结直肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和迁移,其作用机制可能与PI3K/AktmTOR信号通路活性有关联.