人线粒体超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及其在HUVEC中的表达

目的:构建人线粒体超氧化物歧化酶2 (SOD2)的真核细胞表达载体,探讨其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达效果.方法:以HUVEC mRNA为原始模板,应用RT-PCR技术,扩增编码线粒体SOD2全长的cDNA片段.利用分子生物学技术,将扩增的cDNA片段与真核细胞表达载体pcDNA3.0的多酶切位点相连接,构成重组质粒并转染到HUVEC,将细胞分为HUVEC母细胞组、转染pcDNA3.0空载组和转染pcDNA3.0-SOD2组.应用RT-PCR方法检测SOD2在HUVEC中的表达情况.结果:将表达SOD2全长cDNA片段定向克隆至质粒pcDNA3.0,测序结果表明成功构建人线粒体SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2.该载体稳定转染HUVEC后,在细胞内获得了稳定表达.与母细胞组和空载组比较,转染pcDNA3.0-SOD2组SOD2 mRNA表达水平明显增加.结论:成功构建SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2,并在人HUVEC中成功表达.本研究为SOD2对细胞保护作用研究提供了实验模型.