富血小板血浆对体外培养条件下人真皮成纤维细胞增殖能力的影响

目的:探讨富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hDFbs)在体外培养条件下增殖能力的影响,探讨PRP促进皮肤、黏膜伤口愈合的机制.方法:PRP和hDFbs来源于健康成年人,两次离心法制备PRP,倒置相差显微镜观察0、12.5%、25.0%、50.0%和100.0%PRP浓度作用下 hDFbs的增殖;免疫细胞化学检测50.0%浓度不同剂量PRP作用下细胞血小板源性生长因子(PDGF)的表达;荧光染色技术观察PRP作用下hDFbs在纯钛材料表面的生长;流式细胞术检测PRP培养后不同时间hDFbs细胞周期;CCK-8法检测不同浓度PRP培养条件下细胞增殖活力.结果:倒置相差显微镜下见PRP各浓度组细胞数量均多于对照组,细胞数量增加、折光性增强;免疫细胞化学检测,30 μL PRP组PDGF表达量最高且细胞密度最大,但10 μL PRP组累积吸光度值(IOD)高于20 μL PRP组(836.27±21.15 vs 794.35±30.26,P<0.05);荧光染色技术观察,PRP组材料表面hDFbs细胞密集,数量较对照组高;细胞周期检测,PRP促进细胞进入S期进行DNA复制,PRP作用后第2天PRP组S期细胞百分比高于空白组(34.41% vs 22.00%,P<0.05),第8天PRP组G0/G1期细胞百分比高于空白组(95.07% vs 89.70%,P<0.05);CCK-8测定细胞增殖活性,100.0%PRP组吸光度A450值高于12.5%PRP组(34.41% vs 22.00%,P<0.05).结论:高浓度的PRP虽然表现较强的促细胞增殖作用,但并不存在浓度、剂量依赖性,适宜浓度的PRP可促进hDFbs的增殖.